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    分離雞胚背根神經(jīng)節(jié)

    發(fā)布時(shí)間: 2022-12-02  點(diǎn)擊次數(shù): 1021次

    材料與儀器

    酶溶液 DRG
    離心管 培養(yǎng)皿 解剖顯微鏡

    步驟

    解剖前在 15 ml 離心管中配制酶溶液,置 37℃ 水浴特用。

    2. 解剖胚胎,解剖全過程保持組織濕潤(rùn)。

    (1) 殺死胚胎,去腿,放于 100 mm 培養(yǎng)皿。

    (2) 用鈍頭剪刀沿腹中線作一切口,將皮膚向兩側(cè)卷縮至能取出內(nèi)臟。

    (3) CMF-PBS 漂洗體腔。

    (4) 用細(xì)鑷子或用 CMF-PBS 吹打,小心去掉脊柱上的任何黏附組織。

    3. 在解剖顯微鏡下,用細(xì)鑷子從脊髓上細(xì)心撕下脊膜。取出交感神經(jīng)節(jié),即 DRG 上脊髓兩側(cè)的細(xì)條帶。

    4. 用微簧剪刀從神經(jīng)干上剪下神經(jīng)節(jié),用細(xì)鑷子從脊髓上摘下 DRG,放于盛有 1 ml CMF-PBS 的 35 mm 培養(yǎng)皿。

    5. 分離適量 DRG,確保無任何黏附組織或神經(jīng)干,時(shí)間以不超過 45 分鐘為宜。

    6. 在預(yù)熱的酶溶液中加 1 ml 含 DRG 的 CMF-PBS。37℃ 水浴孵育 8 或 13 分鐘,每隔 3 分鐘顛倒一次管子。

    7. 加入 1 ml FBS 終止酶反應(yīng),沉淀 DRG。CMF-PBS 清洗 DRG,再沉淀。

    8. DRG 懸于 1 ml 補(bǔ)給了 NGF 的完培(37℃)。用尖-端內(nèi)徑燒至一半的巴斯德吸管輕輕吹散細(xì)胞(6 次)。如果仍有組織塊殘留,使其沉降,細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至另一支 15 ml 無菌離心管。重復(fù)吹散殘留組織塊,兩次樣品混合。

    9. 計(jì)數(shù)分散細(xì)胞,根據(jù)需要以合適密度接種。

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