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細胞增殖及毒性檢測CCK試劑盒

細胞增殖及毒性檢測CCK試劑盒

簡要描述:
細胞增殖及毒性檢測CCK試劑盒Cell Counting Kit 簡稱 CCK 試劑盒,為 MTT 法的替代方法,是一種基于 WST(水溶性四唑鹽,化學名:2-(2-甲 氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)的廣泛應(yīng)用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。

更新時間:2024-06-26

訪問量:1615

廠商性質(zhì):代理商

生產(chǎn)地址:美國

<strong><strong>細胞增殖及毒性檢測CCK試劑盒</strong></strong>

細胞增殖及毒性檢測CCK試劑盒——CCK8


一、包裝規(guī)格

貨號:K009-100、 K009-500、K009-1000、K009-3000

規(guī)格: 100T 、 500T 、 1000T 、 3000T

儲存條件: 4℃避光保存,有效期一年。


二、產(chǎn)品說明

Cell Counting Kit 簡稱 CCK 試劑盒,為 MTT 法的替代方法,是一種基于 WST(水溶性四唑鹽,化學名:2-(2-甲 氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)的廣泛應(yīng)用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。


CCK 法與其它檢測方法之間的比較:

<strong><strong>細胞增殖及毒性檢測CCK試劑盒</strong></strong>

CCK 用途:藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定等


三、操作說明

Ⅰ、制作標準曲線(測定細胞具體數(shù)量時)

1、先用細胞計數(shù)板計數(shù)所制備的細胞懸液中的細胞數(shù)量,然后接種細胞。

2、按比例(例如:1/2 比例)依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個細胞濃度梯度,一般要做 3-5 個細胞濃度梯度,每組 3-6 個復孔。

3、接種后培養(yǎng) 2-4 小時使細胞貼壁,然后加 CCK 試劑培養(yǎng)一定時間后測定 OD 值,制作出一條以細胞數(shù)量為橫坐標(X 軸),OD 值為縱坐標(Y 軸)的標準曲線。根據(jù)此標準曲線可以測定出未知樣品的細胞數(shù)量(試用此標準曲 線的前提是實驗的條件要一致,便于確定細胞的接種數(shù)量以及加入 CCK 后的培養(yǎng)時間。)


Ⅱ、細胞活性檢測

1、在 96 孔板中接種細胞懸液(100μL/孔)。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預培養(yǎng)(在 37℃,5% CO2 的條件下)。

2、向每孔加入 10 μL 的 CCK 溶液(注意不要在孔中生成氣泡,它們會影響 OD 值的讀數(shù))。

3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育 1-4 小時。

4、用酶標儀測定在 450nm 處的吸光度。

5、如果暫時不測定 OD 值,打算以后測定的話,可以向每孔中加入 10 μL 0.1M 的 HCL 溶液或者 1% w/v SDS 溶 液,并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在 24 小時內(nèi)吸光度不會發(fā)生變化。


Ⅲ、細胞增值-毒性檢測

1、在 96 孔板中配置 100μL 的細胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預培養(yǎng) 24 小時(在 37℃,5% CO2 的條件下)。

2、向培養(yǎng)板加入 10μL 不同濃度的待測物質(zhì)。

3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當?shù)臅r間(例如:6、12、24 或 48 小時)。

4、向每孔加入 10μL CCK 溶液(注意不要在孔中生成氣泡,它們會影響 OD 值的讀數(shù))。

5、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育 1-4 小時。

6、用酶標儀測定在 450nm 處的吸光度。

7、如果暫時不測定 OD 值,打算以后測定的話,可以向每孔中加入 10 μL 0.1M 的 HCL 溶液或者 1% w/v SDS 溶 液,并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在 24 小時內(nèi)吸光度不會發(fā)生變化。

注意:如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性的話,可在加 CCK 之前更換新鮮培養(yǎng)基(除去培養(yǎng)基,并用培養(yǎng)基洗滌細胞兩次,然后加入新的培養(yǎng)基),去掉藥物影響。當然藥物影響比較小的情況下,可以不更換培養(yǎng)基,直接扣除培養(yǎng)基中加入藥物后的空白吸收即可。


備注:

①建議先做幾個孔摸索接種細胞的數(shù)量和加入 CCK 試劑后的培養(yǎng)時間。

②有條件的情況下建議采用多通道移液器,可以減少平行孔減的差異。加入 CCK 試劑時, 建議斜貼著培養(yǎng)板壁加,不要插到培養(yǎng)基頁面下加,容易產(chǎn)生氣泡,會干擾 OD 值讀數(shù)。

③白細胞可能需要培養(yǎng)較長時間。

④當使用標準 96 孔板時,貼壁細胞的最小接種量至少為 1,000 個/孔 (100 μL 培養(yǎng)基)。檢測白細胞時的靈敏度相對較低,因此推薦接種量不低于 2,500 個/孔 (100 μL 培養(yǎng)基)。如果 要使用 24 孔板或 6 孔板實驗,請先計算每孔相應(yīng)的接種量,并按照每孔培養(yǎng)基總體積的 10% 加入 CCK 溶液。

⑤如果沒有 450nm 的濾光片,可以使用吸光度在 430-490 nm 之間的濾光片,但是 450nm 濾光片的檢測靈敏度最高。

⑥培養(yǎng)基中酚紅的吸光度可以在計算時,通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不會對檢測造成影響。


活力計算: 細胞活力*(%)=[A(加藥)-A(空白)]/[A(0 加藥)-A(空白)] ×100

A(加藥):具有細胞、CCK 溶液和藥物溶液的孔的吸光度 A(空白):具有培養(yǎng)基和 CCK 溶液而沒有細胞的孔的吸光度

A(0 加藥):具有細胞、CCK 溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度

*細胞活力:細胞增殖活力或細胞毒性活力 保存條件:4℃干燥避光保存,有效期一年。

僅供科學研究使用,禁止用于它用。


細胞增殖及毒性檢測CCK試劑盒系列貨號規(guī)格:

產(chǎn)品貨號產(chǎn)品名稱產(chǎn)品規(guī)格
K009-100CCK100tests
K009-500CCK500tests
K009-1000CCK1000tests
K009-3000CCK3000tests
K010-100Cell Counting Sensitive Kit100tests
K010-500Cell Counting Sensitive Kit500tests
K010-1000Cell Counting Sensitive Kit1000tests
K010-3000Cell Counting Sensitive Kit3000tests


Zeta Life介紹:
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深圳市安培生物科技有限公司是美國 Zeta Life 公司的中國深圳地區(qū)總代理。精心經(jīng)營細胞培養(yǎng)品試劑,均經(jīng)過反復充分驗證,產(chǎn)品效果好且重復性佳。尊敬的客戶您如在訂購過程中遇到任何問題都可以與我司在線客服聯(lián)系尋求幫助。



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