每個(gè)做細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的人，不管去哪“浪"，心里都會(huì)有個(gè)牽掛：我的細(xì)胞，過兩天要傳代！

大部分組織細(xì)胞離體培養(yǎng)時(shí)，會(huì)以貼壁的形式生長(zhǎng)（除了取自血、脾或骨髓的細(xì)胞）;*培養(yǎng)基中的血清，含有許多帶陽(yáng)性電荷的促細(xì)胞附著因子（層黏連蛋白 Laminine、纖維鏈接蛋白 Fibronectin 等胞外基質(zhì)），能幫助細(xì)胞附著于帶陰性電荷的底物上（玻璃或塑料培養(yǎng)容器），并形成鍵結(jié)、貼壁伸展。

▲ 陽(yáng)性電荷的促細(xì)胞附著因子，能幫助細(xì)胞附著于帶陰性電荷的底物上

所以當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)滿需要分盤的時(shí)后，就要想辦法讓細(xì)胞和培養(yǎng)底物說 再見！也就是所謂的細(xì)胞消化（Cell Detachment）。

常見細(xì)胞消化法有以下三種：

1、物理機(jī)械法

直接用液體吹打或用刮刀，施予外力讓細(xì)胞與培養(yǎng)底物分離；適用于貼壁性弱的細(xì)胞傳代，但相較于其它消化方法，這種外力無法量化控制，細(xì)胞分散效果差，且可能會(huì)造成大量細(xì)胞破損，使內(nèi)容物釋放到培養(yǎng)基，進(jìn)而影響細(xì)胞傳代狀態(tài)。

▲細(xì)胞刮勺

2、離子螯合法

細(xì)胞膜表面蛋白大多需要鈣、鎂離子來維持與胞外基質(zhì)的穩(wěn)定鍵結(jié)，當(dāng)然也包含各種黏附蛋白（例：整合素、鈣黏著蛋白、橋粒等），螯合劑會(huì)在不破壞細(xì)胞膜表面蛋白的狀況下，抽離這些離子，使黏附蛋白失活而減少細(xì)胞-細(xì)胞間及細(xì)胞-底物間的連接作用，讓細(xì)胞較容易在施予外力時(shí)，脫離培養(yǎng)底物并促進(jìn)細(xì)胞分散。

0.02% EDTA是細(xì)胞傳代較為常用的離子螯合劑，在37℃作用效果較為佳（消化較敏感的細(xì)胞可在4℃作用），適用于消化一般貼壁性細(xì)胞或細(xì)胞表面標(biāo)記實(shí)驗(yàn)細(xì)胞。

但EDTA無法用血清終止其反應(yīng)，所以在消化細(xì)胞后必須用緩沖鹽溶液（如：PBS）清洗離心，以免影響后續(xù)細(xì)胞貼盤效果。

▲ EDTA（黑）能螯合二價(jià)離子（紅）

3、酶消化法

用蛋白水解酶消化連接細(xì)胞及培養(yǎng)底物的蛋白質(zhì)，適用于消化貼壁性稍強(qiáng)的細(xì)胞。

細(xì)胞消化小技巧

不一定要一次把所有細(xì)胞都要消化下來！

▲ 消化不下來的細(xì)胞（黃）請(qǐng)視情況決定是否再消化一次。

結(jié)語(yǔ)

細(xì)胞消化 ，是一個(gè)看似很簡(jiǎn)單，但是有很多技術(shù)含量的步驟。消化好壞、是否污染、有無受傷，都在這短短的五六分鐘里決定。

當(dāng)我們已經(jīng)可以順利操作細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，接下來要思考的，就是如何讓細(xì)胞長(zhǎng)得更健康、更均一、做出來的實(shí)驗(yàn)才會(huì)更好。

祝各位的細(xì)胞都顆顆透亮、粒粒分明、活力旺盛！