在做細胞基礎實驗時，必要的一步就是需要探究清楚細胞的增殖變化和毒性耐藥變化情況，為下一步實驗做準備。

我們在做CCK-8增殖和毒性實驗中常常會遇到一下幾個問題：

1.細胞鋪板問題 2.給CCK-8的方式問題 3.CCK-8的反應時間問題

首先，在進行細胞鋪板時， 需要用血球計數(shù)板進行細胞計數(shù)，得到細胞數(shù)量后按照所需鋪板的細胞數(shù)量進行調(diào)整。一般96孔板鋪板數(shù)量為1*10^6/孔。

制備細胞懸液時需要反復吹打，使細胞懸液充分混勻，降低出現(xiàn)細胞團塊的幾率。一般96孔板，每孔加入100微升細胞懸液，從孔的9點鐘方向打入，加入半張板子時，需要再次將細胞吹勻，然后繼續(xù)加剩余的孔。

待全部加入完畢時，蓋上蓋子，放入培養(yǎng)箱。（細胞的均勻鋪被是本實驗成功的大前提）。

其次，是細胞的處理。一般給CCK-8有兩種方式：第一種是直接每孔加入10微升的CCK8原液；另一種則是配置含10%的CCK-8培養(yǎng)基，以換液的形式加入孔板。

第一種方式的弊端在于10微升的CCK-8量比較少，可能因沾在孔壁導致誤差的出現(xiàn)。

第二種方式可以避免上述情況的發(fā)生，但操作過程中仍需注意10%的CCK-8培養(yǎng)基需要現(xiàn)配現(xiàn)用；其次打入100微升的CCK-8時沿著孔壁將槍頭伸入液體緩緩打出，再移出槍頭。

期間可能會產(chǎn)生小氣泡，需要用無菌針頭燒紅插入氣泡，消除氣泡。（氣泡會影響OD值，因此應該盡量消除）。

最后，就是反應時間問題。將孔板放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)1-4小時，引細胞種類和數(shù)量的差異，可能形成的Formazan的量不一樣。因此需要把握好培養(yǎng)的時間。

我的經(jīng)驗是：在培養(yǎng)2h后，取出孔板，每孔抽取90微升加入至新孔板，進行第一次檢測，看看顯色的深淺程度（仍然需要注意氣泡，若有氣泡需要待氣泡消除后再進行檢測）

若顯色較淺，則可除去舊培養(yǎng)基，加入新培養(yǎng)基，再培養(yǎng)1-4小時，重新加CCK-8步驟，然后將其放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)4小時，再進行檢測（其最佳反應時間為0.5、1、2小時）

以上就是本期的內(nèi)容，更多資訊，歡迎點擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術與產(chǎn)品資訊。

安培生物致力成為推動生命科學進步值得信賴的合作者

深圳/湛江安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術實力、先進的經(jīng)營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業(yè)。總部設在廣東，服務面向全國。安培生物集進口試劑、實驗室耗材銷售、技術服務與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司，旨在為生命科學的發(fā)展提供較好的產(chǎn)品與服務。本公司建立了涵蓋分子生物學、細胞生物學、免疫學、信號傳導和神經(jīng)科學等領域的產(chǎn)品供應線，在各個領域內(nèi)向用戶提供較高的水平和質(zhì)量穩(wěn)定的產(chǎn)品，安培生物致力于為廣大的科研機構(gòu)、高等院校等客戶提供各種產(chǎn)品、技術支持與服務。

可以在第一時間為用戶提供比較先進的專業(yè)資訊和完備的產(chǎn)品和物流服務。 專業(yè)的技術力量使得我們能夠為廣大用戶提供強大的技術支持，深厚的人脈資源使得我們在全國主要城市擁有眾多的合作伙伴，安培生物非常榮幸能將世界上先進的高科技產(chǎn)品推薦給國內(nèi)從事生物學領域科研的老師和同仁。作為專業(yè)性的產(chǎn)品供應商，公司出資存?zhèn)淞舜罅楷F(xiàn)貨，配合優(yōu)秀的銷售隊伍以及專業(yè)的技術支持，隨時為客戶提供服務。