轉(zhuǎn)染是實(shí)驗(yàn)過(guò)程中常用的技術(shù)操作，通俗來(lái)說(shuō)，常見的轉(zhuǎn)染即為把某種功能性質(zhì)粒轉(zhuǎn)到細(xì)胞中去，通過(guò)轉(zhuǎn)染試劑的作用在經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后，收集細(xì)胞通過(guò)WB、qpcr等來(lái)檢測(cè)質(zhì)粒是否正常發(fā)揮作用來(lái)達(dá)到我們實(shí)驗(yàn)的某種需求；不同的質(zhì)粒通常有不同的轉(zhuǎn)染試劑和不同的方法，如PEI轉(zhuǎn)染、lipo2000轉(zhuǎn)染等。

Lipofectmine ™ RNAiMAX轉(zhuǎn)染主要供siRNA和Stealth ™ RNAi 雙鏈體轉(zhuǎn)染使用，具有轉(zhuǎn)染效率高、對(duì)細(xì)胞毒性小等優(yōu)點(diǎn)，分為正向轉(zhuǎn)染及反向轉(zhuǎn)染兩種方式。siRNA轉(zhuǎn)染比較常見，因此本文分享主要針對(duì)siRNA反向轉(zhuǎn)染。

轉(zhuǎn)染前準(zhǔn)備

1.準(zhǔn)備試劑包括：Opti-MEM培養(yǎng)基、Lipofectamine™ RNAiMAX試劑、siRNA、不加雙抗的10%FBS培養(yǎng)基、胰酶、PBS緩沖液等常見處理細(xì)胞的試劑。

2.反向轉(zhuǎn)染要求細(xì)胞密度≥90%。

轉(zhuǎn)染中

1.按正常處理細(xì)胞的流程將長(zhǎng)滿的細(xì)胞經(jīng)過(guò)胰酶消化離心后去上清，注意此處需要加無(wú)雙抗的10%FBS培養(yǎng)基1ml進(jìn)行細(xì)胞重懸，重懸完后根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)速度鋪細(xì)胞，保證轉(zhuǎn)染完后24h細(xì)胞密度達(dá)到30-50%。

2.轉(zhuǎn)染復(fù)合物制備：根據(jù)說(shuō)明書制備轉(zhuǎn)染復(fù)合物，添加量如下表所示。

根據(jù)轉(zhuǎn)染的實(shí)際情況將Opti-MEM培養(yǎng)基、Lipofectamine™ RNAiMAX試劑、siRNA依次加入到一個(gè)無(wú)菌Ep管中，按照先加Opti-MEM培養(yǎng)基、再加siRNA最后加Lipofectamine™ RNAiMAX試劑的順序，輕輕混勻室溫孵育20min。

3.20min后依次將轉(zhuǎn)染復(fù)合物加入細(xì)胞培養(yǎng)皿種，輕輕混勻，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)。

轉(zhuǎn)染后

1.轉(zhuǎn)染后24h內(nèi)最好不要挪動(dòng)細(xì)胞，也不要拿出在顯微鏡下觀察，期間也無(wú)需進(jìn)行細(xì)胞換液。

2.轉(zhuǎn)染后48h后，可拿出細(xì)胞觀察細(xì)胞形態(tài)有無(wú)變圓，肉眼觀察轉(zhuǎn)染效率，對(duì)于生長(zhǎng)較慢的細(xì)胞，其表型可能會(huì)在72h內(nèi)逐漸顯現(xiàn)。根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)情況可進(jìn)行換液，注意此時(shí)需要換含雙抗的血清培養(yǎng)基。

3.在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，若細(xì)胞變圓較為厲害，應(yīng)在轉(zhuǎn)染后4天左右收細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染效率測(cè)定，時(shí)間太久細(xì)胞太少的話檢測(cè)難度較大。

4.此種轉(zhuǎn)染方式最長(zhǎng)可維持5-7天的基因敲除效果。

注意事項(xiàng)

1. Lipofectamine™ RNAiMAX試劑在冰箱4℃保存，切記不能冷凍。

2. Lipofectamine™ RNAiMAX試劑不宜在室溫放置過(guò)久，因此在制備轉(zhuǎn)染復(fù)合物前從冰箱拿出，加完后應(yīng)立即放回4℃再進(jìn)行后續(xù)操作。

3.轉(zhuǎn)染復(fù)合物制備完成后室溫孵育時(shí)間不得超過(guò)20min，因此建議將細(xì)胞鋪好板后十字混勻，暫放于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)，再進(jìn)行轉(zhuǎn)染復(fù)合物的制備。

4.siRNA應(yīng)于-80℃保存。

5.在處理細(xì)胞重懸時(shí)一定要使用無(wú)雙抗的10%FBS培養(yǎng)基，避免細(xì)胞死亡，如果在鋪板后還要進(jìn)行細(xì)胞傳代也沒(méi)有影響，直接用上述混懸液傳代即可。

6. Lipofectamine ™ RNAiMAX轉(zhuǎn)染的兩種方式差別不是很大，主要區(qū)別在于正向轉(zhuǎn)染需要提前一天進(jìn)行細(xì)胞鋪板，第二天直接加入轉(zhuǎn)染復(fù)合物，同時(shí)還需要在轉(zhuǎn)染后4-6h進(jìn)行細(xì)胞換液。反向轉(zhuǎn)染速度比正向轉(zhuǎn)染更快，操作較為簡(jiǎn)潔，因此更建議使用反向轉(zhuǎn)染。

以上就是本期的內(nèi)容，更多資訊，歡迎點(diǎn)擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。

安培生物致力成為推動(dòng)生命科學(xué)進(jìn)步值得信賴的合作者

深圳/湛江安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術(shù)實(shí)力、先進(jìn)的經(jīng)營(yíng)管理水平和完善的市場(chǎng)銷售體系的生物高科技企業(yè)。總部設(shè)在廣東，服務(wù)面向全國(guó)。安培生物集進(jìn)口試劑、實(shí)驗(yàn)室耗材銷售、技術(shù)服務(wù)與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司，旨在為生命科學(xué)的發(fā)展提供較好的產(chǎn)品與服務(wù)。本公司建立了涵蓋分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)、信號(hào)傳導(dǎo)和神經(jīng)科學(xué)等領(lǐng)域的產(chǎn)品供應(yīng)線，在各個(gè)領(lǐng)域內(nèi)向用戶提供較高的水平和質(zhì)量穩(wěn)定的產(chǎn)品，安培生物致力于為廣大的科研機(jī)構(gòu)、高等院校等客戶提供各種產(chǎn)品、技術(shù)支持與服務(wù)。

可以在第一時(shí)間為用戶提供比較先進(jìn)的專業(yè)資訊和完備的產(chǎn)品和物流服務(wù)。 專業(yè)的技術(shù)力量使得我們能夠?yàn)閺V大用戶提供強(qiáng)大的技術(shù)支持，深厚的人脈資源使得我們?cè)谌珖?guó)主要城市擁有眾多的合作伙伴，安培生物非常榮幸能將世界上先進(jìn)的高科技產(chǎn)品推薦給國(guó)內(nèi)從事生物學(xué)領(lǐng)域科研的老師和同仁。作為專業(yè)性的產(chǎn)品供應(yīng)商，公司出資存?zhèn)淞舜罅楷F(xiàn)貨，配合優(yōu)秀的銷售隊(duì)伍以及專業(yè)的技術(shù)支持，隨時(shí)為客戶提供服務(wù)。