午夜精彩视频在线观看免费视频,最新国产剧情无码AV网址,日韩欧美理论在线观看,久久噜噜噜精品国产亚洲综合

銷售熱線

19126518388
  • 技術(shù)文章ARTICLE

    您當(dāng)前的位置:首頁 > 技術(shù)文章 > 分子克隆實驗---第三章:測序結(jié)果解讀

    分子克隆實驗---第三章:測序結(jié)果解讀

    發(fā)布時間: 2025-03-31  點擊次數(shù): 170次

    一代測序是克隆實驗中常見的下游實驗?,F(xiàn)代 DNA 測序技術(shù)源于 Sanger 鏈末端終止測序法,其工作原理與 Sanger 測序不同的是 4 組反應(yīng)的雙脫氧核苷酸分別用不同的熒光分子標(biāo)記,每個試管的產(chǎn)物在光激發(fā)下發(fā)出不同顏色的熒光,延伸反應(yīng)和鏈終止完成后,將全部 4 組反應(yīng)物混合,在同一泳道進(jìn)行凝膠電泳,通過激光束激發(fā)熒光分析不同位置堿基的熒光顏色完成測序分析。


    一般情況下,測序信號文件多為 *.ab1 文件,該文件能夠得到每個堿基的測序峰型及整體質(zhì)量;*.seq 文件則為 ab1 文件導(dǎo)出得到的測序結(jié)果序列,ab1 文件中已具有堿基序列信息,因此 *.seq 文件可不作重點關(guān)注。


    一代測序的每次測序反應(yīng)能夠產(chǎn)生約 600-900bp 堿基信息,測序開始的 5 端約 50bp 左右的測序信號不穩(wěn)定,檢測 800bp 左右之后信號開始衰減,各種波之間有重疊等情況。這部分結(jié)果信息不準(zhǔn)確,不建議參考使用。

    理想狀態(tài)的測序信號應(yīng)當(dāng)是獨立單一的峰形信號,波峰與波谷清晰,峰與峰之間的距離均勻,波峰底部沒有雜峰干擾,此時得到的堿基信息可信度超高;測序信號出現(xiàn)雙峰、套峰等情況時,該處堿基信息可信度低,需要其他測序結(jié)果共同比對分析



           

    測序問題的主要原因:
    ◆ 套峰
    a) 全雙峰:多引物結(jié)合位點(菌液、質(zhì)粒);非特異擴增(PCR 產(chǎn)物);
    b) 前雙峰:多引物結(jié)合位點,其中一套模板測序中斷(菌液、質(zhì)粒);多引物結(jié)合位點(PCR
    擴增未純化產(chǎn)物);引物二聚體或小片段干擾(PCR 產(chǎn)物純化非切膠樣品);
    c) 中間雙峰:非單克?。ň?、質(zhì)粒);堿基缺失或等位基因雙模板(PCR 擴增未純化產(chǎn)物);
    d) 后雙峰:非單克隆(菌液、質(zhì)粒);堿基缺失(PCR 產(chǎn)物)。


    ◆ 測序信號

    a) 無信號:引物結(jié)合位點不存在或被破壞;
    b) 信號差:引物或模板的質(zhì)量不高,或引物和模板匹配性低,或樣本濃度偏低;
    c) 信號衰減:可能因測序序列的特殊結(jié)構(gòu)導(dǎo)致,如 Poly 結(jié)構(gòu)、重復(fù)序列、回文結(jié)構(gòu)、發(fā)卡結(jié)構(gòu)、GC 富集、AT 富集等;若為正常峰形后逐漸衰減,可能模板反應(yīng)量不足;
    d) 信號中斷:模板存在高級結(jié)構(gòu),導(dǎo)致 dNTP 和 ddNTP 在某位點無法與模板結(jié)合;
    e) 測序移碼:測序開端移碼可能是引物降解,局部移碼可能樣本存在高級結(jié)構(gòu);

    f) 測序底峰干擾:可能測序引物不純;可能測序樣品不純混有正、反向引物。


    優(yōu)化方案:套峰

    二聚體、小片段干擾:凝膠電泳,切膠純化回收;                                                          
    多引物結(jié)合位點:更換引物測序或反向測通;
    堿基缺失:構(gòu)建單克隆后測序;
    非單克隆:在載體構(gòu)建克隆正確下重新挑取單克隆測序;
    非特異性擴增:優(yōu)化反應(yīng)條件重新制備;

    等位基因雙模板:構(gòu)建單克隆后測序。


    測序信號

    無信號:更換引物或重新提供樣品測序;
    信號差:提供高質(zhì)量樣品測序;
    信號衰減:特殊結(jié)構(gòu)導(dǎo)致衰減,建議反向測序拼接;若正常峰形后逐漸衰減:提供高質(zhì)量樣品;
    測序中斷:建議反向測序測通;
    測序底峰干擾:重新制備模板,引物 PAGE 膠純化。


    安培生物致力成為推動生命科學(xué)進(jìn)步值得信賴的合作者

    深圳/湛江安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術(shù)實力、先進(jìn)的經(jīng)營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業(yè)??偛吭O(shè)在廣東,服務(wù)面向全國。安培生物集進(jìn)口試劑、實驗室耗材銷售、技術(shù)服務(wù)與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司,旨在為生命科學(xué)的發(fā)展提供較好的產(chǎn)品與服務(wù)。本公司建立了涵蓋分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)、信號傳導(dǎo)和神經(jīng)科學(xué)等領(lǐng)域的產(chǎn)品供應(yīng)線,在各個領(lǐng)域內(nèi)向用戶提供較高的水平和質(zhì)量穩(wěn)定的產(chǎn)品,安培生物致力于為廣大的科研機構(gòu)、高等院校等客戶提供各種產(chǎn)品、技術(shù)支持與服務(wù)??梢栽诘谝粫r間為用戶提供比較先進(jìn)的專業(yè)資訊和完備的產(chǎn)品和物流服務(wù)。 專業(yè)的技術(shù)力量使得我們能夠為廣大用戶提供強大的技術(shù)支持,深厚的人脈資源使得我們在全國主要城市擁有眾多的合作伙伴,安培生物非常榮幸能將世界上先進(jìn)的高科技產(chǎn)品推薦給國內(nèi)從事生物學(xué)領(lǐng)域科研的老師和同仁。作為專業(yè)性的產(chǎn)品供應(yīng)商,公司出資存?zhèn)淞舜罅楷F(xiàn)貨,配合優(yōu)秀的銷售隊伍以及專業(yè)的技術(shù)支持,隨時為客戶提供服務(wù)












產(chǎn)品中心 Products
欧美成人精品一区二区免费看| 人妻夜夜添夜夜无码AV| 国产又粗又猛又色又免费| 夫妻性生活视频在线直播| 哈啊慢点不要了视频| 八插8插黄色视频| 人妻人久久精品中文字幕| 色婷婷五月综合久久| 日本一区二区高清免费不卡| 嗯嗯嗯啊啊啊好湿好痒好多水视频| 中文字幕一区二区三区中文字幕| 护士毛片在线看中文字幕| 日韩精品无码一区二区三区不卡| 久久久久亚洲精品无码系列| 深插巴西美女的逼| 亚洲综合极品香蕉久久网| 日本乱人伦中文在线播放| 大鸡鸡插我骚逼视频| 国产成人AV一区二区在线观看| 欧美国产日韩a欧美在线| 啊啊好想被大鸡巴操视频| 新视觉亚洲三区二区一区理伦| 色噜噜人妻丝袜中文字幕| 三级片在线无码播放| 国产三级精品久久久久| 插插插插插插插插插插插| 国产精品久久一区二区三区动| 骚逼被狂插视频教程| 亚洲男性天堂一区二区三区| 一区二区三区四区五六区| 一区二区三区中文欧美| 爱爰哦好粗好猛操b视频| 成人 在线 欧美 日韩| 综合伊人久久在一二三区| 久久免费国产视频| 国产精品999午夜激情| 午夜成人理论片在线观看| 日本免费一区二区在线| 日韩伦理视频一区二区三区| 日韩欧美视频在线观看不卡| 国产精品久久久久妇|